Las transcriptasas inversas (RTs) son ADN polimerasas dirigidas por ARN que sintetizan una copia de ADN (ADNc) a partir de un ARN diana. Para aplicar la PCR al estudio del ARN, la muestra de ARN debe transcribirse primero de forma inversa a ADNc para proporcionar la plantilla de ADN necesaria para la posterior PCR.
En la RT-PCR, tras un paso inicial de transcripción inversa para producir la plantilla de ADNc, se realiza la PCR para amplificar la secuencia diana. En la RT-PCR de un paso, la transcripción inversa y la PCR se realizan en una sola mezcla de reacción. En la RT-PCR de dos pasos, la reacción de transcripción inversa se realiza por separado y el ADNc producido se añade a una PCR posterior.
La transcriptasa inversa de AMV se recomienda para la RT-PCR de un paso y de dos pasos, la RT-qPCR, la transcripción inversa de ARN <5kb y la extensión de cebadores, especialmente si el ARN molde tiene una estructura secundaria fuerte.
La transcriptasa inversa M-MLV mutante del punto H es la enzima de elección para la transcripción inversa de ARN largos para la construcción de bibliotecas de ADNc, la generación de sondas de ADNc y la extensión de cebadores.
GoScript™ Reverse Transcriptase es una formulación de M-MLV optimizada para su uso en RT-qPCR de un paso y de dos pasos y en la transcripción inversa de dianas raras y abundantes. GoScript funciona bien en presencia de muchos inhibidores de amplificación comunes.