Les transcriptases inverses (TI) sont des ADN polymérases dirigées par l’ARN qui synthétisent une copie d’ADN (ADNc) à partir d’un ARN cible. Pour appliquer la PCR à l’étude de l’ARN, l’échantillon d’ARN doit d’abord être transcrit de manière inverse en ADNc pour fournir la matrice d’ADN nécessaire à la PCR ultérieure.
Dans la RT-PCR, après une étape initiale de transcription inverse pour produire la matrice d’ADNc, la PCR est effectuée pour amplifier la séquence cible. Dans la RT-PCR en une étape, la transcription inverse et la PCR sont réalisées dans un seul mélange réactionnel. Dans la RT-PCR en deux étapes, la réaction de transcription inverse est réalisée séparément, et l’ADNc produit est ajouté à une PCR ultérieure.
La transcriptase inverse de l’AMV est recommandée pour la RT-PCR en une étape et en deux étapes, la RT-qPCR, la transcription inverse des ARN <5kb et l’extension des amorces, en particulier si l’ARN matrice présente une forte structure secondaire.
La transcriptase inverse M-MLV RNase H- point mutant est l’enzyme de choix pour la transcription inverse de longs ARN pour la construction de banques d’ADNc, la génération de sondes d’ADNc et l’extension d’amorce.
La transcriptase inverse GoScript™ est une formulation M-MLV optimisée pour une utilisation dans la RT-qPCR en une et deux étapes et la transcription inverse de cibles rares et abondantes. GoScript se comporte bien en présence de nombreux inhibiteurs d’amplification courants.
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