L’objectif de cette étude était d’évaluer l’activité antifongique des nanoémulsions encapsulant l’huile essentielle d’origan (Origanum vulgare), à la fois in vitro et après application sur le fromage Minas Padrão. Les nanodispersions ont été obtenues par la méthode de température d’inversion de phase. Les genres Cladosporium sp., Fusarium sp. et Penicillium sp. ont été isolés des échantillons de fromage et utilisés pour évaluer l’activité antifongique. Les concentrations minimales inhibitrices de l’huile essentielle d’origan non encapsulée et encapsulée ont été déterminées, et elles étaient influencées par l’encapsulation de l’huile essentielle en fonction du type de champignon. L’activité antifongique de l’huile essentielle d’origan nanoencapsulée dans des tranches de fromage n’a pas montré d’effet des CMI, lorsqu’elle était appliquée dans la matrice. En revanche, une influence du temps de contact de la nanoémulsion avec le fromage a été observée, en raison de l’augmentation de l’activité de l’eau. Il a été conclu que l’huile essentielle d’origan nanoencapsulée présentait un effet inhibiteur contre les trois genres de champignons évalués. Si les paramètres environnementaux, tels que la température de stockage et l’activité de l’eau, étaient contrôlés, l’effet inhibiteur des nanoémulsions d’huile d’origan pourrait éventuellement être grandement amélioré, et elles pourraient être présentées comme une alternative potentielle pour la préservation du fromage Minas Padrão contre la contamination fongique.